目的：建立一套適用的培養(yǎng)操作規(guī)程，進(jìn)行無污染條件下體外細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)。

主體內(nèi)容：

操作步驟：

1、紫外燈照射超凈工作臺30分鐘（根據(jù)實(shí)際情況，可適當(dāng)延長或縮短照射時(shí)間，但時(shí)間長一點(diǎn)總比時(shí)間短一點(diǎn)安全。）

2、將培養(yǎng)液、PBS、胰酶放在37℃水浴中溫育（每次用多少，溫育多少，這樣既可節(jié)約溫育的時(shí)間，又可延長藥品的使用期限。）

3、超凈工作臺照射30分鐘后，關(guān)閉紫外，打開照明，打開排風(fēng)10分鐘后再次進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)室。（注意：要打開排風(fēng)10分鐘后再進(jìn)行操作，這樣才能保證循環(huán)的風(fēng)是無菌的。同時(shí)還會避免有菌的風(fēng)直接吹到人的呼吸道中，對人體也有一定的保護(hù)作用）

4、戴上kouzhao及手套（有條件的**好戴上帽子，不過也沒關(guān)系，我們實(shí)驗(yàn)室就沒戴）

5、用70-75%的酒精擦試實(shí)驗(yàn)物品，然后拿入超凈工作臺中。

6、操作時(shí)注意以下幾點(diǎn)：盡量在酒精燈火焰附近操作，但如果管子里有細(xì)胞就要離火焰有一定距離了，否則細(xì)胞要燙死了；不要重復(fù)使用移液管（即吸一次后，就換新的管）；不要在敞開的容器上方操作；手上的酒精不要擦太多，否則靠近酒精燈時(shí)容易把手燒到（我想很多人都有過被燒的經(jīng)歷吧）；

其實(shí)操作是很簡單的，但一定要仔細(xì)。尤其是第2步許多人都不注意，細(xì)胞平時(shí)放在37℃培養(yǎng)，如果加入的PBS或胰酶溫度太低，會對細(xì)胞有操傷的，雖然這種損傷短期內(nèi)察覺不到，但時(shí)間長了，就會顯現(xiàn)出來。